近日，賽分（美國）科技有限公司的國際合作伙伴美國REGENXBIO公司的研究人員在《Journal of Pharmaceutical Sciences》雜志上發(fā)表了題為《Impact of Time Out of Intended Storage and Freeze-thaw Rates on the Stability of Adeno-associated Virus 8 and 9》的文章*（點擊底部左下角“閱讀原文”獲取文章鏈接），介紹了AAV腺病毒載體TOIS和凍融率的穩(wěn)定性考察結(jié)果。文章中提到了賽分科技SRT SEC-1000色譜柱應用于分析AAV中游離DNA和聚體的應用案例。

背景介紹

　　腺相關(guān)病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）載體作為一種基因?qū)胂到y(tǒng)，具有安全性好，免疫原性低，能感染分裂細胞和非分裂細胞，能介導基因的長期穩(wěn)定表達等優(yōu)點，因此在神經(jīng)系統(tǒng)的體內(nèi)和體外研究中，受到越來越多的關(guān)注和重視。AAV在基因治療方面的發(fā)展勢頭越來越大，越來越多的臨床試驗將其用于各種治療。

文章概述

　　腺相關(guān)病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成員之一。近年越來越多研究AAV作為基因治療的載體，AAV 載體包含一條長達 4.7 kb 的 ssDNA，包含在由 60 種單獨蛋白質(zhì)組成的二十面體衣殼中。

　　AAV在制造和儲存過程中的化學和物理降解會導致純度降低和效力喪失。通過設計合理的處方，降低保存溫度，可以減小AAV化學和物理產(chǎn)生的降解，AAV可長期貯存于-60℃條件下，短期可置于2~8℃冰箱中。在生產(chǎn)、標記和臨床使用過程中會發(fā)生凍融 （Freeze-thaw，F(xiàn)/T）循環(huán)和暴露于室溫和冷藏的情況，需要考察其F/T穩(wěn)定性。

　　生物技術(shù)新銳REGENXBIO公司，就超出預期儲存時間（time out of intended storage，TOIS）和凍融率對AAV8和AAV9穩(wěn)定性的影響進行深入的研究。研究人員設計三個不同處方，將低濃度和高濃度的 AAV8 和 AAV9 暴露在五個F/T循環(huán)中，在“daisy chain”中TOIS穩(wěn)定性研究。考察不同配方下，樣品的載體基因組濃度，SEC 峰前含量，DLS 的尺寸分布等指標考察TOIS和凍融率對藥物制劑的影響。結(jié)果表明，AAV8 和 AAV9產(chǎn)品質(zhì)量屬性保持在可接受的范圍內(nèi)，二者具有適用于制造和臨床操作的穩(wěn)定性曲線，并具有額外的偏移量。

聚體及游離DNA檢測

　　聚體及游離DNA檢測：文中提到使用粒徑為5 μm，孔徑為1000 Å的賽分科技SRT SEC-1000分析色譜柱，用于檢測游離DNA以及聚體含量。從分析圖譜中可以看到樣品中的聚體和游離DNA可以實現(xiàn)很好的分離。

　　據(jù)了解，REGENXBIO公司多個AAV載體的項目，均采用賽分科技的SEC系列產(chǎn)品進行分析，并定入質(zhì)量標準。之前的文獻速遞欄目中，介紹賽分科技客戶賽諾菲在《Human Gene Therapy》發(fā)表檢測AAV樣品中全衣殼的方法，其中介紹使用SRT SEC-500作為檢測色譜柱，用于確定空衣殼和完整衣殼相對量。

　　* Bee JS, Zhang YZ, Phillippi MK, etc. J Pharm Sci. 2022 Jan 7:S0022-3549(22)00004-1. doi: 10.1016/j.xphs.2022.01.002.

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